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DH5α感受態(tài)細(xì)胞說明書
點擊次數(shù):2828 更新時間:2015-05-21

 

DH5α感受態(tài)細(xì)胞說明書

   DH5α Competent Cell

   目錄號:YJ0808

 

   保存條件:-80℃保存。

 

   組分說明

 

                      Cat. No.                         YJ0808B

                      Size                             10×100  μl

                      DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                      Control DNA pUC19,0.1    ng/μl      10 μl

 

   產(chǎn)品簡介

 

    本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA

的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載

體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補,可用于藍(lán)白斑篩選 recA1和endA1的突變

有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可

達(dá)108,適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

注意事項

 

 1.感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在 -80℃下保存,不可反復(fù)凍融和放

    置時間過長,以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2.轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3.包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗使用。

 

    操作步驟

 

 1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100                                  μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。

       以下實驗以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

 2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量

    的DNA,通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

 3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

 4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃

    搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

 5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的                                      SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,

    倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。

 

 注意:1)涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300         μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少,可通過離心(4,000rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

   2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

   3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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